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高通量单细胞RNA转录组测序理论和成功案例

发布时间:2018-11-01 16:45

高通量单细胞RNA转录组测序理论和成功事例  
 
任何时候,细胞转录的一切RNA都称为转录病毒,包含RNA mrna和未编码RNA。对本组进行精确而深入的剖析有助于更好地了解,细胞基因的表达和调控网络。相同安排的细胞类型简直相同,但亚单位的表达往往不同,转录组更好地反映了甲基和组蛋白等改变的差异。不同安排的细胞有共同的转录组,能够研讨这些组,以便从不同的生理和表征角度解说基因调控网络。
   一般转录试验往往需求不计其数乃至数百万细胞,但第一批胚胎细胞和干细胞是了解反转录病毒所需的基因调控网络所必需的,阅读人类胚胎的发育只能在微型细胞上搜集,这需求在试验中运用最少的细胞,最好是在单细胞一级。排序它,RNA时代-单细胞序列是一种新的放大和测序技能,单细胞转录组年纪。
 
   单细胞转录组是在特定生理状态下转录的mrna一切产品的调集,是遗传信息传递和表达的一个重要过程和过程。与参考基因比较,能够获得基因调控信息,如基因表达差异、可变切片和交融基因。
 
   技能优势:
 
   1. 运用malbac技能扩展转录组;
 
   2. 无物种资历,mrna聚合尾结构要求;
 
   3. 高分辨率:简略碱分辨率;
 
   4. 高复盖率:简直能够复盖一切转录序列;
 
   5. 范围广泛的测验:从几份复制到几十万份复制都是精确的,能够与一般和稀有的记载一同辨认和量化。
 
   抽样条件:
 
   取样要求:挂号、污染防备、恰当取样。
 
   安排标本应在手术切除后当即冷冻保存(液态氮或- 80c ),并在一年内保存;全血(或骨髓)样品应至少5毫升,从血管中取样,分红抗凝管,保存在- 80c;
 
   细胞悬浮液体或细胞体系,有必要依照细胞冻住规范操作,并经过细胞冻住温度梯度保持在液氮或- 80c;
 
   主张独自的单细胞样品运用ph值为7。7月2日。4 1 PBS缓冲器(不包含Ca2 +和Mg2 + )加1 % BSA细胞停留液,总量不超越2 μl,当即完成液氮的快速冷冻和干冰运送。
 
   肿瘤样本的主张巨细为1 - 2c m3 (太大,无法冻住样本,太小,无法满意样本数量),困难或有价值的样本的主张巨细至少为5 mm3。
 
   成功典范:
 
   按次序,单细胞转录组年纪绘制人预植入胚胎和胚胎干细胞转录组图
 
   对处于不同发育阶段的90个胚胎细胞和人类胚胎干细胞体系( hescs )的34个细胞进行了细胞转录组排序和详细剖析。
 
   ( 1 )绘制了世界上最全面的人类胚胎发育基因表达图,发现了22 687个矩阵表达基因,其间8 701个基因没有长期编码,ne ( lncrnas ),与从前经过cdna微网络检测到的9 735个新生基因比较,有明显添加。
 
   ( 2 ) 在国际一级,初次成功分离了囊状胚胎阶段的三个胚胎细胞(上皮细胞、初级上皮细胞和养分上皮细胞)。
 
   ( 3 )在植入前的人类胚胎中发现了2 700多种新的lnc RNA,do。
       

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